本產(chǎn)品僅供科研，不得做其它用途

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本產(chǎn)品就是根據(jù)PCR原理專門(mén)開(kāi)發(fā)的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。

2. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

3. 產(chǎn)品精心優(yōu)化且特異性高，引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟除此之外的其它微生物DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。

4. PCR mix中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。

5. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的PCR反應(yīng)。

6. 本產(chǎn)品只能用于定性實(shí)驗(yàn)，不能用于定量。

7. 本產(chǎn)品只能用于科研

香菇源性成分PCR試劑盒樣品的制備　

1. 如果有N個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2個(gè)提取反應(yīng)，多出的兩個(gè)中一個(gè)是 PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照）。可以用 10μL 牛乳頭瘤病毒 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（1×10E6 拷貝/μL，本試劑盒提供）再加上一定量的水作為制備的陽(yáng)性對(duì)照（加水后其總體積跟樣品一樣，樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求）?？梢杂盟鳛橹苽涞年幮詫?duì)照。

2. 用自選方法純化上述 N+2 個(gè)樣品的 DNA。本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)細(xì)菌提取試劑盒兼容。

電泳分析　

1. 取 5-10uL 擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行常規(guī)瓊脂糖電泳，檢測(cè)擴(kuò)增效果，由于擴(kuò)增產(chǎn)物較短，建議用 1.5%-2.0%的瓊脂糖凝膠。

2. 陽(yáng)性樣品預(yù)期得到的擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度為 200bp 左右。如果兩個(gè)陰性對(duì)照（樣品制備陰性對(duì)照或 PCR 陰性對(duì)照）有此擴(kuò)增產(chǎn)物，說(shuō)明環(huán)境污染，則整個(gè)實(shí)驗(yàn)無(wú)效，不需要分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

3. 如果所有樣品和 PCR 陽(yáng)性對(duì)照均無(wú)此擴(kuò)增產(chǎn)物，則說(shuō)明有系統(tǒng)性的問(wèn)題（試劑、設(shè)備、程序、操作等），需要重復(fù)并排查原因。

4. 如果沒(méi)有上述兩種情況，則實(shí)驗(yàn)有效，可以分析樣品的擴(kuò)增結(jié)果。N+2 個(gè)樣品中有擴(kuò)增產(chǎn)物的判定為陽(yáng)性，無(wú)則判定為陰性。

使用方法：

一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E1-10E6 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。

由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供無(wú)傳染性的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。

1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 6，5，4，3，2，1。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液，最好用帶芯槍頭，下同。

3. 在 6 號(hào)管中加入 5μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 4 號(hào)管中加入 5μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E4 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

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