血清血漿TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒采用加A法進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，加A法的反轉(zhuǎn)錄效率遠(yuǎn)高于莖環(huán)法，因此，采用該方法可極大

的提高檢測(cè)靈敏度（原理見(jiàn)圖1）。該試劑盒操作簡(jiǎn)單，僅需要兩步即可輕松完成miRNA的cDNA合成，合成的cDNA可用于

所有miRNA的后續(xù)定量檢測(cè)。miRNA反轉(zhuǎn)錄完畢后采用特異性的上游引物和接頭引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，F(xiàn)AM標(biāo)記TaqMan探針

作為熒光報(bào)告基團(tuán)進(jìn)行定量檢測(cè)（原理見(jiàn)圖1）。

專(zhuān)用于血清血漿miRNAs分子的反轉(zhuǎn)錄試驗(yàn)（不可用于組織和細(xì)胞），

轉(zhuǎn)錄獲得的cDNA產(chǎn)物用于TaqMan定量PCR方法檢測(cè)miRNAs分子

組分

組分名稱(chēng)數(shù)量(25T/100T）

5×TaqMan miRNA RT Solution A65μl/250μl

10×TaqMan miRNA RT Solution B65μl/250μl

10×PS TaqMan miRNA RT Primer65μl/250μl

RNase Free H2O1ml/1mlx2

儲(chǔ)存

請(qǐng)置于-20°C，可保存2年；避免反復(fù)凍融。

血清血漿TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽(yáng)性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類(lèi)型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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