Equi-phi29 DNA Polymerase試劑是phi29的改造體，并經(jīng)多次純化分離而得。在保留了phi29 DNA聚合酶的鏈置換、連續(xù)合成特性（>70kb）的基礎(chǔ)上，提高了滾環(huán)擴(kuò)增的反應(yīng)溫度，該酶酶可以在42℃條件下持續(xù)的進(jìn)行DNA合成（而phi29 DNA 聚合酶在此溫度下反應(yīng)活性很低）。

這種高溫的反應(yīng)特性，在以下幾個方面對實驗有明顯的提升：（1）在NGS測序中，其提升了高GC含量、回文結(jié)構(gòu)等復(fù)雜模板的延伸能力，使得NGS的覆蓋度更均一，降低測序所需深度；（2）高溫的反應(yīng)條件，提升了基因組DNA的WGA產(chǎn)物的合成量，并可以進(jìn)行變溫擴(kuò)增；（3）降低測序中Gap區(qū)域，提升單細(xì)胞測序的數(shù)據(jù)質(zhì)量和完整度；（4）降低非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物；（5）提升MDA/RCA等實驗的擴(kuò)增性能和特異性。

此外，Equi-phi29 DNA Polymerase仍然具有很強(qiáng)的3’-5’外切酶校讀功能，合成的DNA片段保真性高。該酶的外切酶活性較強(qiáng)，因此合成過程中引物需要3’端硫代修飾，以降低外切活性對引物的切割效應(yīng)。

主要特征

鏈置換能力

連續(xù)合成能力

擴(kuò)增的高保真性

應(yīng)用

DNA恒溫滾環(huán)擴(kuò)增

需強(qiáng)鏈置換和DNA連續(xù)合成的反應(yīng)

質(zhì)粒快速復(fù)制

高保真快速復(fù)制

儲存

-20℃可保存3年。

Equi-phi29 DNA Polymerase試劑恒溫擴(kuò)增使用策略及實例展示

應(yīng)用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺期)。

應(yīng)用實例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

應(yīng)用實例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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